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微核試驗的種類

發布時間：2021-09-09 277

　　微核試驗的種類可以分為五大類，下面會對這五個微核試驗的種類逐個介紹。

　　常規微核試驗

　　利用細胞生物學方法經顯微制片后在顯微鏡下直接計數待測材料微核率的方法。這是普遍采用的基本方法，可以分為兩類：

　　1)將微核試驗材料，在加人待測物質的環境中培養一段時間，染色制片，顯微觀察計算微核率。

　　2)直接將受遺傳毒理損害生物的相應材料制片，顯微觀察計算微核率。

　　細胞分裂阻滯微核分析法

　　1985年fenech等人建立的方法，用胞質分裂阻滯劑阻斷胞質分裂，但是不影響細胞核分裂，有絲分裂細胞呈特殊形態的雙核細胞，未發生核分裂的細胞則維持單核細胞形態.檢測致突變因素作用后的雙核細胞率與雙核細胞微核率，可同時獲得致突變因素對細胞的遺傳毒性損害與對細胞周期影響的信息。

　　熒光原位雜交試驗與DNA探針

　　熒光原位雜交（Flu-orescenceinsituhybridization，FISH)技術是近年來開展起來的分子生物學新技術。它是使用生物熒光素標記的各類DNA和RNA探針與細胞或組織在玻片上進行原位雜交，被觀察的特定DNA片段(或序列)在熒光顯微鏡下固定在細胞核或染色體的原有部位顯示熒光。

　　利用熒光原位雜交試驗可以檢測是染色體斷裂還是染色體丟失，以及可以判斷是哪一條染色體，那一段所產生的微核。目前已成功用于MN實驗的DNA探針主要有兩類：

　　第一類：是含DNA重復序列的探針，主要用于檢測染色體著絲粒的DNA。

　　第二類：是含染色體端粒DNA序列的探針，它主要顯示染色體臂的存在。

　　若兩種探針結合使用。則可以較為準確地判MN的組成情況，即是染色體段片還是整條染色體，以及各自的數目。

　　目前，在原位雜交的基礎上又發展出了多彩色熒光原位雜交技術，它使用幾種不同的熒光素單獨或混合標記的探針進行原位雜交，在熒光顯微鏡下顯現不同的顏色，因而可以同時檢測間期或中期細胞中的幾個特異核酸序列。它能夠普遍應用在物理圖譜繪制、致突變研究，腫瘤病理和產前診斷等方面。

　　抗著絲粒抗體染色(CREST染色）

　　抗著絲粒抗體(Anti一kinetochoreantibodies)是美國學者Moroi及其同事于1980年在硬皮病病人血清中發現的一種自動抗體，這些自動抗體可以通過免疫熒光技術檢測到。他們與染色體著絲粒蛋白(抗原)成分相結合。具有較強的特異性。

　　但是并不全部硬皮病病人的血清中都含有該自動抗體，含該抗體的病人皮膚損害往往并不嚴重和廣泛。但卻有顯著的CREST征。所以將用該種病人的血清對染色體著絲粒的染色直接稱為CREST染色(CRESTstaining)。CREST染色用來區分MN來源(染色體段片還是整條染色體)，了解誘導MN的化合物性質(斷裂劑還是整倍體劑)。